RNE33 广谱型植物RNA提取试剂盒（gDNA-Filter）

货号	RNE33
介绍	强力裂解液HL，适用性非常广泛，可以从多种植物组织（包括多糖多酚植物）中成功提取高质量RNA，也适用于真菌、一些细菌和一些酵母的RNA提取。 gDNA-Filter Columns快速去除绝大部分基因组残留。

试剂盒组成

Component	RNE33 （50 preps）
Buffer HL	30 ml
Buffer RW1	40 ml
Buffer RW2 (concentrate)	13 ml（Add indicated ethanol before first use）
RNase-free H₂O	10 ml
gDNA-Filter Columns with Collection Tubes	50
Spin Columns RA with Collection Tubes	50

保存方法

室温（15-30℃）保存。

产品介绍

本试剂盒配备强力裂解液HL，适用性非常广泛，可以从多种植物组织（包括多糖多酚植物、海洋藻类）中成功提取高质量RNA，也适用于真菌及各种富含糖类、酚类的动物组织如低等的软体动物、昆虫等样品的RNA提取，也适用于一些细菌和一些酵母的RNA提取。
独特的裂解液配方，迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，有效去除多糖多酚对RNA提取的影响，无需苯酚、氯仿等试剂。本试剂盒使用gDNA-Filter Columns去除基因组DNA，乙醇调节结合条件后，RNA吸附于硅基质膜上，使得提取的总RNA纯度高、gDNA残留少、无蛋白质和其它杂质的污染，可用于Real Time RT-PCR、RT-PCR、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、PolyA筛选、体外翻译和分子克隆等多种下游实验。

RNA得率

植物叶片（100 mg）	总RNA量（μg）
小麦	~45
拟南芥	~40
棉花	~35

产品特点

1. 简便快速，针对植物样本开发，20 min内快速完成RNA提取。
2. 兼容性强，不仅适用于普通茎叶类样本，也适用多糖多酚样本。

实验例

使用Flying Shark^TM Universal Plant RNA Kit (gDNA-Filter)（RNE33）提取总RNA，洗脱体积均为50 μl，RNA电泳上样量均为2 μl，1%琼脂糖凝胶电泳，6 V/cm，电泳20 min，M：Marker III。
1-2：艾草；3-4：棉花；5-6：葡萄；7-8：大豆；9-10：花椒；11-12：水稻；13-14：马铃薯

关于植物RNA提取试剂盒优化升级的说明

最新研发改良的植物RNA强力裂解液HL，适用性非常广泛，可以从多种植物组织（包括多糖多酚型）、真菌、一些细菌、一些酵母中成功提取高质量RNA（用于细菌、酵母的RNA提取均有客户案例，例如山东省农科院某课题组使用某厂家酵母RNA提取试剂盒提取酵母RNA失败，转而使用诺贝莱RNE35广谱型植物RNA提取试剂盒成功提取）。

诺贝莱植物RNA提取试剂盒共有三款，分别是“RNE31植物RNA快速提取试剂盒”，“RNE35广谱型植物RNA提取试剂盒（DNase I）”，“RNE33多糖多酚植物RNA提取试剂盒（gDNA清除柱）”，他们均配备强力裂解液HL，相同的裂解纯化系统（最高RNA得率超过70 μg）；区别在于去除DNA残留的方式不一样，如下表：

Flyingshark™植物RNA提取系列	去除DNA方式	提取时间min	下游实验
RNE31植物RNA快速提取试剂盒	不去除	10-15	用于对DNA残留不敏感的实验或者去除DNA后用于所有RNA实验
RNE35广谱型植物RNA提取试剂盒（DNase I）	DNase I	30-40	直接用于所有RNA实验
RNE33多糖多酚植物RNA提取试剂盒（gDNA清除柱）	gDNA清除柱	15-20	直接用于所有RNA实验

以实验案例做具体解释。分别以上述三款试剂盒提取80 mg新鲜小麦叶片RNA，每组两次重复，50 μl RNase-free H₂O洗脱，RNA溶液做两倍稀释后取1 μl进行琼脂糖凝胶电泳（125 V，25 min），电泳图谱如下：

通过电泳图可以直观对比三款试剂盒的提取效果：电泳条带全部清晰明亮无降解，RNE31存在少量的DNA残留，RNE35和33均无明显DNA污染。以超微量核酸蛋白检测仪测定RNA浓度，结果如下表：

货号	浓度（ng/μl）	OD260/280	OD260/230
RNE31	1107	2.06	2.06
RNE31	1030	2.03	2.02
RNE35 (DNase I)	970	2.04	2.02
RNE35 (DNase I)	952	2.06	2.04
RNE33 (gDNA清除柱)	876	2.05	2.04
RNE33 (gDNA清除柱)	874	2.04	2.02

RNE31得率在50 μg以上，RNE35得率在45 μg以上，RNE33得率在40 μg以上。
除此之外，RNE31和RNE35还增加了过滤柱套件（Filter Columns FS）用于过滤去除裂解上清中可能残留的组织碎片，更能确保RNA纯度的稳定性。

附录1

最新强力裂解液HL是在老款HL裂解液基础上，经过科学的优化配方配比改良而来，提高了裂解液的裂解能力和提取的灵敏度。试剂盒中所有溶液全部采用进口分子生物学级生化试剂配制，辅以先进的配制工艺确保不同批次间稳定性极佳。

使用RNE35广谱型植物RNA提取试剂盒（DNase I）提取80 mg连翘叶片，每组两次重复，50 μl RNase-free H₂O洗脱，RNA溶液做两倍稀释后取1 μl进行琼脂糖凝胶电泳（125 V，25 min），电泳图谱如下：

电泳条带清晰明亮无降解，无DNA残留。测定RNA浓度如下表：

	浓度（ng/μl）	OD260/280	OD260/230
升级后	990	2.07	2.04
升级后	1011	2.06	2.07
升级前	906	2.04	2.08
升级前	888	2.03	2.07

简单测算升级后浓度提高~23%。

使用RNE35广谱型植物RNA提取试剂盒（DNase I）提取80 mg夏至草叶片，每组两次重复，50 μl RNase-free H₂O洗脱，RNA溶液做五倍稀释后取1 μl进行琼脂糖凝胶电泳（125 V，25 min），电泳图谱如下：

电泳条带清晰明亮无降解，无DNA残留。测定RNA浓度如下表：

	浓度（ng/μl）	OD260/280	OD260/230
升级后	1466	2.02	2.04
升级后	1489	2.06	2.11
升级前	1167	2.08	2.03
升级前	1144	2.04	2.01

简单测算升级后浓度提高~28%。

附录2

DNase I是一种需二价阳离子的脱氧核糖核酸内切酶，可用于降解单链或双链DNA。用于不含DNA的RNA制备，去除体外转录之后的模板DNA，在RT-PCR及RT-qPCR反应前制备不含DNA的RNA等实验。

诺贝莱生物配制的DNase I（货号RNE36），无RNase污染，高效特异消化残留的DNA，兼容所有离心柱式RNA提取试剂盒。柱上消化效果如下述电泳图：

附录3

1. 电泳图显示28 S条带暗，18 S亮，就一定是RNA降解吗？

实际上，RNA跑琼脂糖电泳是一个比较方便但并不特别严格的检测RNA质量的手段，当RNA上样量过高，或胶中染色剂浓度较低时会出现过载现象，导致28 S没有被染色剂饱和，此时可以尝试降低RNA上样量或直接提高染色剂浓度。

下图展示的是一个RNA上样过载导致28 S比18 S暗的例子，当对RNA做适当稀释，减少上样量后，28 S恢复正常显色。

如何判断是降解还是上样过载呢？观察上图红色箭头指示的条带两端，两端亮中间暗，则大概率上是染色剂缺失造成的28 S未被饱和。

RNE33 广谱型植物RNA提取试剂盒（gDNA-Filter）

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